Βασικές προϋποθέσεις για την κυτταροκαλλιέργεια
1. Κατάλληλο μέσο κυτταροκαλλιέργειας
Ένα κατάλληλο μέσο κυτταροκαλλιέργειας είναι μία από τις σημαντικότερες προϋποθέσεις για την ανάπτυξη των κυττάρων και τον πολλαπλασιασμό in vitro. Το μέσο καλλιέργειας όχι μόνο παρέχει κυτταρική διατροφή και βασικές ουσίες για την προώθηση της ανάπτυξης και του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, αλλά παρέχει επίσης ένα περιβάλλον διαβίωσης για την ανάπτυξη και την αναπαραγωγή καλλιεργημένων κυττάρων.
2. Ορός υψηλής ποιότητας
Επί του παρόντος, τα περισσότερα συνθετικά μέσα απαιτούν την προσθήκη ορού. Ο ορός είναι ένα από τα πιο σημαντικά συστατικά στο μέσο κυτταροκαλλιέργειας, που περιέχει μια ποικιλία αυξητικών παραγόντων και άλλων θρεπτικών συστατικών που απαιτούνται για την ανάπτυξη των κυττάρων.
3. Σταθερή θερμοκρασία ανάπτυξης κυττάρων
Για να διατηρηθεί η έντονη ανάπτυξη των καλλιεργημένων κυττάρων, πρέπει να υπάρχει μια σταθερή και κατάλληλη θερμοκρασία.
4. Κατάλληλο περιβάλλον αερίου
Το αέριο είναι μία από τις απαραίτητες προϋποθέσεις για την επιβίωση των κυττάρων των θηλαστικών και τα απαιτούμενα αέρια είναι κυρίως οξυγόνο και διοξείδιο του άνθρακα.
5. Θερμοκρασία κυτταροκαλλιέργειας
Για να διατηρηθεί η έντονη ανάπτυξη των καλλιεργημένων κυττάρων, πρέπει να υπάρχει μια σταθερή και κατάλληλη θερμοκρασία. Διαφορετικοί τύποι κυττάρων έχουν διαφορετικές απαιτήσεις για τη θερμοκρασία καλλιέργειας. Η πρότυπη θερμοκρασία για την καλλιέργεια ανθρώπινων κυττάρων είναι 36,5 °C ± 0,5 °C. Η απόκλιση από αυτό το εύρος θερμοκρασιών θα επηρεάσει τον φυσιολογικό μεταβολισμό των κυττάρων και ακόμη και θα πεθάνει.
6. Κατάλληλο περιβάλλον αερίου
Το αέριο είναι μία από τις απαραίτητες προϋποθέσεις για την επιβίωση της κυτταροκαλλιέργειας θηλαστικών και τα απαιτούμενα αέρια είναι κυρίως οξυγόνο και διοξείδιο του άνθρακα. Το οξυγόνο συμμετέχει στον κύκλο του τρικαρβοξυλικού οξέος, παράγοντας ενέργεια για την ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και συνθέτοντας διάφορα συστατικά που απαιτούνται για την ανάπτυξη των κυττάρων.
Κοινή μόλυνση της κυτταροκαλλιέργειας
1. Βακτηριακή μόλυνση
Η βακτηριακή μόλυνση είναι η πιο κοινή. Μόλις η λειτουργία είναι ελαφρώς ακατάλληλη, θα προκαλέσει μόλυνση των κυττάρων. Μετά από βακτηριακή μόλυνση, θα εμφανιστεί ως μαύρες λεπτές λωρίδες άμμου όταν παρατηρηθούν κάτω από το μικροσκόπιο. Σε σχήμα ράβδου κ.λπ. Δεύτερον, το μέσο καλλιέργειας γίνεται κίτρινο και θολό, και τα λεπτά ιζήματα σε σχήμα άμμου μπορούν να φανούν καθαρά στο τρυβλίο petri και υπάρχει μια περίεργη μυρωδιά από καιρό σε καιρό.
2. Μυκητιασική μόλυνση
Το διάλυμα καλλιέργειας που έχει μολυνθεί από μύκητες είναι σαφές και διαφανές, όχι σαν ένα μεγάλο ξέσπασμα βακτηριακής λοίμωξης, οπότε είναι δύσκολο να το ανιχνεύσετε νωρίς. Μερικές φορές μοιάζει με ένα νήμα κάτω από το μικροσκόπιο, μερικές φορές μοιάζει με κοράλλι και σιγά-σιγά θα αναπτυχθεί ένα πολύ λεπτό μαύρο νήμα. Αυτό Όταν είναι πολύ αργά, είναι δύσκολο για τα κύτταρα να διασωθούν.
3. Μόλυνση μούχλας
Σύμφωνα με τις μυκητιασικές λοιμώξεις, επειδή το μέσο καλλιέργειας είναι σαφές, η μυκητιασική μόλυνση είναι δύσκολο να ανιχνευθεί νωρίς, όταν είναι συχνά πολύ αργά. Οι κροκιδωτικές ακαθαρσίες εμφανίστηκαν αργά στο μέσο καλλιέργειας και τα νηματοειδή αιωρούμενα αντικείμενα μάζας μπορούσαν να παρατηρηθούν κάτω από το μικροσκόπιο, όπως τα catkins στον άνεμο. Τα κύτταρα μπορούν ακόμα να αναπτυχθούν, αλλά με την πάροδο του χρόνου, τα κύτταρα επιδεινώνονται και σταματούν να αναπτύσσονται.
4. Λοίμωξη από μυκόπλασμα
Το μέσο καλλιέργειας γίνεται θολό. Αφού το μυκόπλασμα μολύνει τα κύτταρα, οι κυτταροπαθητικές αλλαγές δεν είναι προφανείς, αλλά η κυτταρική κατάσταση γίνεται χειρότερη και η ανάπτυξη επιβραδύνεται. Μπορεί να υπάρχουν μικρές μαύρες κηλίδες κάτω από το μικροσκόπιο, αλλά το μέσο καλλιέργειας γενικά δεν είναι θολό. Μετά τη διέλευση των κυττάρων, εμφανίστηκαν ενδοκυτταρικές μαύρες κηλίδες, τα κύτταρα κενοτοπίστηκαν και πολλά κύτταρα έμοιαζαν με απόπτωση και νέκρωση. Τελικά, τα κύτταρα επέπλεαν και πέθαναν εντελώς.
Πρόληψη της κυτταρικής μόλυνσης
Η θέσπιση καλών κανόνων και κανονισμών μπορεί να συμβάλει σημαντικά στη μείωση της μόλυνσης των κυττάρων. Συμπεριλαμβανομένου του συστήματος πρόσβασης, των κανόνων λειτουργίας και του συστήματος καθημερινής διαχείρισης.
Σύστημα πρόσβασης: συμπεριλαμβανομένου του προσωπικού και του υλικού. Το προσωπικό πρέπει να εκπαιδευτεί για να μπορέσει να λειτουργήσει μόνο του και πρέπει να πληροί τις απαιτήσεις φθοράς πριν εισέλθει στο εργαστήριο, όπως λευκά παλτά, φορέματα απομόνωσης, μάσκες, γάντια κ.λπ. Για τα απαραίτητα αντικείμενα, τα μη αναλώσιμα αντικείμενα πρέπει να αποστειρώνονται και να αποστειρώνονται αυστηρά και τα αγορασμένα αντικείμενα πρέπει να αγοράζονται από κανονικά και αξιόπιστα κανάλια. Τα κύτταρα που αγοράστηκαν πρόσφατα θα πρέπει να δοκιμαστούν και να επαληθευτούν πριν από τη χρήση.
Προδιαγραφές λειτουργίας: Είναι καλύτερο να διατυπωθούν προδιαγραφές για συνήθεις εργασίες και το προσωπικό του εργαστηρίου πρέπει να ακολουθεί τις προδιαγραφές λειτουργίας, οι οποίες δεν μπορούν να αλλάξουν κατά βούληση, και επίσης να καλλιεργεί καλές συνήθειες λειτουργίας για το εργαστηριακό προσωπικό. Για παράδειγμα, αφού αναρροφηθεί η άκρη της πιπέτας, δεν θα επεκταθεί στο μέσο για δεύτερη φορά και μια επαρκής ποσότητα μέσου θα αναρροφηθεί μία φορά. Κατά την προσθήκη υγρού, το υγρό πρέπει να προστίθεται σε εναιώρημα όσο το δυνατόν περισσότερο, γεγονός που μπορεί να αποτρέψει αποτελεσματικά τη μόλυνση από μυκόπλασμα και τη διασταυρούμενη μόλυνση των κυττάρων. Επιπλέον, εάν είναι δυνατόν, να λειτουργεί μόνο μία κυτταρική σειρά κάθε φορά και είναι προτιμότερο να υπάρχει ένα μικρό χρονικό διάστημα μεταξύ των κυττάρων για να αποφευχθεί η διασταυρούμενη μόλυνση.
Σύστημα καθημερινής διαχείρισης: Περιλαμβάνει κανόνες και μεθόδους για τη χρήση, τον καθαρισμό και τη συντήρηση του περιβάλλοντος και αναλωσίμων, αντιδραστηρίων κ.λπ. Υπάρχει επίσης διαχείριση της κατανάλωσης, της απογραφής και της προμήθειας αντιδραστηρίων και αναλωσίμων, συμπεριλαμβανομένης της διαχείρισης αποθεμάτων δύο επιπέδων των δειγμάτων κυττάρων. Για τις πηγές μόλυνσης που δεν είναι εύκολο να βρεθούν, είναι καλύτερο να διεξάγονται τακτικές δοκιμές, κυρίως μόλυνση μυκοπλάσματος και διασταυρούμενη μόλυνση των κυττάρων.
Το BKMAM Bio παρέχει αντίστοιχα αναλώσιμα για κυτταροκαλλιέργεια:
Πλαστικά στρογγυλά/τετράγωνα πιάτα petri μιας χρήσης:
Υλικό πολυστερίνης υψηλής διαφάνειας (PS).
Η επιφάνεια είναι λεία και επίπεδη και δεν υπάρχει οπτική παραμόρφωση των κυττάρων υπό παρακολούθηση μικροσκοπίου.
Ο σχεδιασμός στοίβαξης διευκολύνει τη στοίβαξη και την αποθήκευση.
Αποστείρωση οξειδίου του αιθυλενίου (EO).
Αντοχή στη φθορά και τη διάβρωση.
Προσκολλημένη θεραπεία των πιάτων κυτταροκαλλιέργειας:
Υλικό πολυστερίνης (PS).
Αποστείρωση δέσμης ηλεκτρονίων, χωρίς πυρογόνο, χωρίς τοξίνη.
Επεξεργασία επιφάνειας πλάσματος κενού, εξαιρετική πρόσφυση κυττάρων.
Η επιφάνεια είναι λεία και επίπεδη και δεν υπάρχει οπτική παραμόρφωση των κυττάρων υπό παρακολούθηση μικροσκοπίου.
Η σχεδίαση με δυνατότητα στοίβαξης διευκολύνει τη στοίβαξη και την αποθήκευση.
Πλάκες πλαστικής κυτταροκαλλιέργειας:
Υλικό πολυστερίνης (PS).
Κατάλληλο για φυσιολογική κυτταροκαλλιέργεια, μη προσκολλημένο τύπο πλάκας θεραπείας.
Χωρίς πυρογόνο, χωρίς τοξίνη, αποστειρωμένο.
Εύκολη ανεξάρτητη συσκευασία τύπου δακρύων, εύκολη στη χρήση.
Προσκολλημένη επεξεργασία των πλακών κυτταροκαλλιέργειας:
Υλικό πολυστερίνης (PS).
Τύπος πλάκας θεραπείας προσκόλλησης (θεραπεία TC), κατάλληλος για την καλλιέργεια προσκολλημένων κυττάρων.
Χωρίς πυρογόνο, χωρίς τοξίνη, αποστειρωμένο.
Εύκολη ανεξάρτητη συσκευασία τύπου δακρύων, εύκολη στη χρήση.
Όλα είναι επίπεδα πυθμένα.
Συγκολλητική επεξεργασία των φιαλών κυτταροκαλλιέργειας:
Υλικό πολυστερίνης (PS).
Αποστείρωση δέσμης ηλεκτρονίων, χωρίς πυρογόνο, χωρίς τοξίνη.
Επεξεργασία επιφάνειας πλάσματος κενού, εξαιρετική πρόσφυση κυττάρων.
Αναπνεύσιμο κάλυμμα, το οποίο ευνοεί την ανταλλαγή αερίων και εμποδίζει τη διέλευση μικροοργανισμών.
Κρυοτοιχίες εσωτερικής/εξωτερικής περιστροφής:
100% καθαρό υλικό πολυπροπυλενίου (PP).
Μπορεί να αντέξει 15psi, 121 °C αποστείρωση;
Το τοίχωμα του σωλήνα είναι παχύρρευστο και το σώμα του σωλήνα έχει κλίμακα και περιοχή γραφής.
Υπάρχει μια σφράγιση δακτυλίου σιλικόνης μεταξύ του σπειρώματος καλύμματος σωλήνα και του σώματος του σωλήνα για να εξασφαλιστεί η στεγανότητα.
Χωρίς DNase, χωρίς RNase, χωρίς πυρογόνο, χωρίς ενδοτοξίνη.
